Atividade de laboratório de eletroforese e determinação do comprimento de fragmentos de DNA

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Dúvidas

Descrição
Exigência Complementar

As enzimas de restrição são enzimas capazes de clivar ou cortar moléculas de DNA em locais muito específicos, com base na sequência de bases da molécula de DNA. Sua descoberta e isolamento na segunda metade do século 20 proporcionaram aos cientistas uma ferramenta inestimável e rapidamente se expandiram no campo da biologia molecular. A eletroforese em agarose é uma técnica para separar os fragmentos de DNA resultantes do uso de enzimas de restrição.Nesta atividade, os alunos realizarão a eletroforese em agarose em três amostras de DNA que já foram tratadas com enzimas de restrição. Uma amostra foi cortada com a enzima HindIII, uma foi cortado com a enzima EcoRI e uma foi cortada com ambas as enzimas. O padrão resultante das faixas de DNA no gel de agarose mostrará que cada enzima afeta o DNA de maneira diferente. Es alunos aprenderão não apenas sobre o processo de eletroforese de DNA, mas também as técnicas associadas ao processo, como preparar um gel de agarose, carregar amostras de DNA no gel de agarose e coloração do gel para visualizar as bandas de DNA. Eles também aprenderão como determinar os tamanhos de fragmentos de DNA desconhecidos após examinar seus resultados. O kit inclui amostras de DNA especialmente tratadas que não requerem refrigeração ou congelamento, agarose preparada que pode simplesmente ser derretida em banho-maria ou microondas, tampão de eletroforese TBE e DNA stain. Há DNA suficiente para administrar 10 géis.

O kit inclui:
200 ml solução a 0,8% de agarose preparada
500 ml de tampão ETA Tris Borato, 5X
60 ml de DNA Stain 20X
100 µl de DNA Lambda/EcoRI diluído com corante de carregamento
100 µl de DNA Lambda/HindIII diluído com corante de carregamento
100 µl de DNA Lambda/EcoRI, HindIII diluído com corante de carregamento

São necessárias, mas não fornecidas, as câmaras de eletroforese em agarose, fontes de alimentação e micropipetas capazes de medir 10 µl.