Activité de laboratoire Electrophorèse et détermination de la longueur des fragments d'ADN

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Description
Nécessaire

Les enzymes de restriction sont des enzymes capables de cliver ou de couper des molécules d'ADN à des endroits (appelés sites) très spécifiques en fonction de la séquence des bases de la molécule d'ADN. Leur découverte et leur isolement dans la seconde moitié du XXe siècle ont fourni aux scientifiques un outil précieux et leur utilisation s’est rapidement développée dans le domaine de la biologie moléculaire. L'électrophorèse sur gel d’agarose est une méthode permettant de séparer les fragments d'ADN résultant de l'utilisation d'enzymes de restriction. Dans le cadre de cette activité, les élèves effectueront une électrophorèse sur gel d'agarose sur trois échantillons d'ADN qui ont déjà été traités avec des enzymes de restriction. Un échantillon a été coupé avec l'enzyme HindIII, un autre avec l'enzyme EcoRI et un troisième avec les deux enzymes. La structure des bandes d'ADN qui en résulte sur le gel d'agarose montre que chaque enzyme exerce une influence différente sur l'ADN. Les élèves vont non seulement se familiariser avec le processus d'électrophorèse de l'ADN, mais aussi avec les techniques associées à ce processus, telles que la préparation d'un gel d'agarose, le placement d'échantillons d'ADN dans le gel d'agarose et la coloration du gel afin de visualiser les bandes d’ADN. Ils apprendront également à déterminer la taille de fragments d'ADN inconnus après avoir analysé leurs résultats. Le kit comprend des échantillons d'ADN ayant subi un traitement spécial qui ne nécessitent pas de réfrigération ni de congélation, du gel d'agarose préparé qui peut simplement être fondu dans un bain d'eau chaude ou dans un four micro-ondes, un tampon TBE pour électrophorèse et un colorant d'ADN. La quantité d'ADN est suffisante pour utiliser 10 gels.

Le kit comprend :
200 ml Gel d’agarose préparé, solution 0,8%
500 ml Tampon Tris Borate ETA , 5X
60 ml Colorant d’ADN, 20X
100 µl ADN lambda/EcoRI Digest avec colorant de charge
100 µl ADN lambda/HindIII Digest avec colorant de charge
100 µl ADN lambda/EcoRI, HindIII Digest avec colorant de charge

Matériel nécessaire mais non fourni : cuves d'électrophorèse sur gel d’agarose, alimentations et micropipettes capables de mesurer 10 µL.