Attività lab: elettroforesi e determinazione lunghezza frammento DNA

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Gli enzimi di restrizione sono enzimi capaci di scindere, o tagliare, le molecole di DNA in punti molto specifici, sulla base della sequenza di basi delle molecole di DNA. La loro scoperta e isolamento nella seconda metà del XX secolo ha fornito agli scienziati un prezioso strumento e si è rapidamente espansa nel campo della biologia molecolare. L’elettroforesi con agarosio è una tecnica per la separazione dei componenti del DNA derivanti dall’uso di enzimi di restrizione. In questa attività, gli studenti eseguiranno un’elettroforesi con agarosio su tre campioni di DNA già trattati con enzimi di restrizione. Un campione è stato tagliato con l’enzima HindIII, uno con l’enzima EcoRI e uno con entrambi gli enzimi. Lo schema risultante di bande di DNA sul gel di agarosio dimostrerà che ciascun enzima influisce sul DNA in modo differente. Gli studenti non solo apprenderanno informazioni sul processo di elettroforesi del DNA, ma impareranno anche le tecniche legate al processo, come la predisposizione del gel di agarosio, il caricamento di campioni di DNA nel gel di agarosio e la colorazione del gel per visualizzare le bande di DNA. Inoltre, apprenderanno come determinare le dimensioni di frammenti di DNA sconosciuti dopo l’esame dei relativi risultati. Il kit include campioni di DNA appositamente trattati che non richiedono refrigerazione o congelamento, agarosio preparato che può essere semplicemente fuso in un bagno di acqua calda o in microonde, buffer TBE per elettroforesi e colorante per DNA. È presente DNA sufficiente per 10 gel.

Il kit include:
200 ml di agarosio preparato, soluzione allo 0,8%
500 ml di buffer ETA Tris-borato, 5 X
60 ml di colorante per DNA, 20 X
100 µL di digeriti del DNA Lambda/EcoRI con caricamento di colorante
100 µL di digeriti del DNA Lambda/HindIII con caricamento di colorante
100 µL di digeriti del DNA Lambda/EcoRI,HindIII con caricamento di colorante

Sono necessarie, ma non in dotazione, camere per elettroforesi con agarosio, alimentatori e micropipette con capacità di misurazione di 10 µL.