Рестрикционные ферменты представляют собой ферменты, которые способны расщеплять или разрезать молекулы ДНК в очень специфических точках на основе последовательности оснований молекулы ДНК. Их открытие во второй половине 20-го века предоставило ученым неоценимый инструмент и быстро расширило возможности в области молекулярной биологии. Агарозный электрофорез - это метод разделения фрагментов ДНК, полученных в результате использования ферментов рестрикции. В этой лабораторной работе студенты проведут электрофорез в агарозе на трех образцах ДНК, которые уже были обработаны рестриктазами. Один образец был разрезан ферментом HindIII, один разрезан ферментом EcoRI, а один разрезан обоими ферментами. Полученный рисунок полос ДНК на агарозном геле покажет, что каждый фермент влияет на ДНК по-разному. Студенты не только узнают о процессе электрофореза ДНК, но и изучат методы, связанные с этим процессом, такие как установка геля агарозы, загрузка образцов ДНК в гель агарозы и окрашивание геля для визуализации полос ДНК. Они также узнают, как определить размеры неизвестных фрагментов ДНК после изучения их результатов. Набор включает специально обработанные образцы ДНК, которые не требуют охлаждения или замораживания, приготовленную агарозу, которую можно просто расплавить в горячей воде или в микроволновой печи, буфер TBE для электрофореза и окрашивание ДНК. ДНК достаточно для запуска 10 гелей.
Комплект включает в себя:
200 мл приготовленной агарозы, 0,8% раствор
500 мл трис-боратного буфера ETA, 5X
60 мл ДНК краситель, 20Х
100 мкл лямбда ДНК/EcoRI расщепление с загрузочным красителем
100 мкл лямбда ДНК/HindIII расщепление с загрузочным красителем
100 мкл лямбда ДНК/EcoRI,HindIII расщепление с загрузочным красителем
Необходимы, но не поставляются камеры для электрофореза в агарозе, источники питания и микропипетки, способные измерять 10 мкл.