Actividad de laboratorio de electroforesis y de determinación de la longitud de fragmentos de ADN

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Las enzimas de restricción son elementos capaces de escindir o cortar moléculas de ADN en secciones muy específicas a partir de la secuencia de bases de la molécula. Su descubrimiento y aislamiento, ocurrido durante la mitad posterior del siglo XX, proporcionó a los científicos una herramienta invalorable y rápidamente expandida en el campo de la biología molecular. La electroforesis de la agarosa constituye una técnica que permite separar las partes del ADN resultantes de la aplicación de las enzimas de restricción. En esta actividad, los estudiantes ejecutarán la electroforesis de la agarosa en tres muestras de ADN previamente tratadas con enzimas de restricción. Una de las muestras ha sido cortada por medio de la enzima HindIII, otra por la EcoRI y, finalmente, otra, por estas dos enzimas. El patrón resultante de la banda de ADN del gel de agarosa mostrará que cada enzima afecta de manera diferente al ADN. Los estudiantes no solo aprenderán aspectos acerca del proceso de la electroforesis del ADN sino también técnicas asociadas a dicho proceso, tales como la preparación de un gel de agarosa, la mezcla de las muestras de ADN en dicho gel, además del teñido con el fin de visualizar la banda de ADN. Tras examinar sus resultados, también aprenderán la manera en que se determinan los tamaños de los fragmentos desconocidos de ADN. El kit incluye muestras de ADN especialmente tratadas de manera que no requieran refrigeración ni congelamiento, agarosa preparada que simplemente se puede derretir en un baño maría o en el microondas, tampón de TBE para electroforesis y tinte de ADN. Contiene suficiente ADN como para preparar 10 geles.

El kit incluye:
200 ml de agarosa preparada, solución al 0,8%
500 ml de tampón tris borato ETA, 5X
60 ml tinte de ADN, 20X
100 µl de DNA de lambda / EcoRI Digest con tinte de carga
100 µl de DNA de lambda / HindIII Digest con tinte de carga
100 µl de DNA de lambda / EcoRI, HindIII Digest con tinte de carga

No se incluye en el suministro pero se requieren cámaras de electroforesis en agarosa y fuentes de alimentación, así como micropipetas con capacidad para realizar mediciones de 10 µl.