As enzimas de restrição são enzimas capazes de clivar ou cortar moléculas de DNA em locais muito específicos, com base na sequência de bases da molécula de DNA. Sua descoberta e isolamento na segunda metade do século 20 proporcionaram aos cientistas uma ferramenta inestimável e rapidamente se expandiram no campo da biologia molecular. A eletroforese em agarose é uma técnica para separar os fragmentos de DNA resultantes do uso de enzimas de restrição.Nesta atividade, os alunos realizarão a eletroforese em agarose em três amostras de DNA que já foram tratadas com enzimas de restrição. Uma amostra foi cortada com a enzima HindIII, uma foi cortado com a enzima EcoRI e uma foi cortada com ambas as enzimas. O padrão resultante das faixas de DNA no gel de agarose mostrará que cada enzima afeta o DNA de maneira diferente. Es alunos aprenderão não apenas sobre o processo de eletroforese de DNA, mas também as técnicas associadas ao processo, como preparar um gel de agarose, carregar amostras de DNA no gel de agarose e coloração do gel para visualizar as bandas de DNA. Eles também aprenderão como determinar os tamanhos de fragmentos de DNA desconhecidos após examinar seus resultados. O kit inclui amostras de DNA especialmente tratadas que não requerem refrigeração ou congelamento, agarose preparada que pode simplesmente ser derretida em banho-maria ou microondas, tampão de eletroforese TBE e DNA stain. Há DNA suficiente para administrar 10 géis.
O kit inclui:
200 ml solução a 0,8% de agarose preparada
500 ml de tampão ETA Tris Borato, 5X
60 ml de DNA Stain 20X
100 µl de DNA Lambda/EcoRI diluído com corante de carregamento
100 µl de DNA Lambda/HindIII diluído com corante de carregamento
100 µl de DNA Lambda/EcoRI, HindIII diluído com corante de carregamento
São necessárias, mas não fornecidas, as câmaras de eletroforese em agarose, fontes de alimentação e micropipetas capazes de medir 10 µl.